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產(chǎn)品中心
PKH67細(xì)胞連接試劑盒 細(xì)胞染色

PKH67細(xì)胞連接試劑盒 細(xì)胞染色

簡要描述:

PKH67細(xì)胞連接試劑盒 細(xì)胞染色PKH67細(xì)胞連接試劑盒(用于常規(guī)細(xì)胞膜標(biāo)記)(PKH67 Cell Linker Kit for General Cell Membrane Labeling)是一款基于熒光探針PKH67,用于常規(guī)細(xì)胞膜標(biāo)記的檢測(cè)試劑盒,適用于體外細(xì)胞標(biāo)記,體外細(xì)胞增殖以及長期的體內(nèi)細(xì)胞跟蹤研究等。

產(chǎn)品時(shí)間:2024-11-11

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PKH67細(xì)胞連接試劑盒(用于常規(guī)細(xì)胞膜標(biāo)記)


產(chǎn)品關(guān)鍵詞:

PKH67;PKH26;Calcein AM鈣黃綠素;PKH67;CFDA SE;In vivo cell tracking體內(nèi)細(xì)胞示蹤;Sigma MINI26;Phanos Technologies;


產(chǎn)品信息

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品編號(hào)              

規(guī)格              

價(jià)格(元)      

PKH67 Cell Linker Kit for General Cell Membrane Labeling

PKH67細(xì)胞連接試劑盒(用于常規(guī)細(xì)胞膜標(biāo)記)

MX4023-100UL

100μl

996

MX4023-200UL

200μl

1946

MX4023-500UL

500μl

3886

【好消息】:應(yīng)客戶的要求,我司對(duì)試劑盒內(nèi)的Diluent C可單獨(dú)供應(yīng),產(chǎn)品信息如下:

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品編號(hào)                

規(guī)格                  

價(jià)格(元)          

Diluent C for General Membrane Labeling

稀釋液C(用于常規(guī)細(xì)胞膜標(biāo)記)

MX4022-10ML

10ml

296

MX4022-30ML

30ml

586


產(chǎn)品描述

PKH67細(xì)胞連接試劑盒(用于常規(guī)細(xì)胞膜標(biāo)記)(PKH67 Cell Linker Kit for General Cell Membrane Labeling)是一款基于熒光探針PKH67,用于常規(guī)細(xì)胞膜標(biāo)記的檢測(cè)試劑盒,適用于體外細(xì)胞標(biāo)記,體外細(xì)胞增殖以及長期的體內(nèi)細(xì)胞跟蹤研究等。


PKH67是一種專li的膜標(biāo)記探針,與PKH1和PKH2相比,結(jié)構(gòu)上帶有更長的脂肪族碳尾,能穩(wěn)定插入細(xì)胞膜脂質(zhì)區(qū)域。正因具更長碳尾,內(nèi)部數(shù)據(jù)連續(xù)性證明:PKH67具有比PKH2更低的細(xì)胞-細(xì)胞間轉(zhuǎn)運(yùn)發(fā)生。PKH67呈綠色熒光(見圖1),最大激發(fā)波長為490nm,最大發(fā)射波長是502nm,與標(biāo)準(zhǔn)熒光素(Fluorescein)濾片兼容。PKH67非常適合用于細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn),與碘化丙啶(PI,MX4205)或7-氨基放線jun素D(7-AAD,MX4215)這些細(xì)胞活力探針聯(lián)合使用,或者與橙-紅色熒光探針比如藻紅蛋白(PE,MX4698)、紅色熒光蛋白(RFP)等結(jié)合使用。根據(jù)染料稀釋原理,PKH67常用于細(xì)胞增殖監(jiān)測(cè)分析,包括抗原特異性的前體頻率和帶干細(xì)胞特性的靜息/緩慢分化腫瘤細(xì)胞的鑒定。也能用于監(jiān)測(cè)外泌體或脂質(zhì)體吞噬,細(xì)胞-細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)、吞噬、抗原遞呈,以及體內(nèi)細(xì)胞運(yùn)輸研究。


以不分裂細(xì)胞為研究對(duì)象,通過對(duì)體外細(xì)胞膜滯留周期和體內(nèi)熒光強(qiáng)度減弱頻率的關(guān)聯(lián)性分析,預(yù)測(cè)PKH67的體內(nèi)熒光半衰期為10-12天。這與PKH1和PKH2的體內(nèi)半衰期相近,這兩個(gè)探針都成功用于監(jiān)測(cè)周期長達(dá)1-2個(gè)月的體內(nèi)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞運(yùn)輸研究,因此,PKH67適用于需要綠色熒光細(xì)胞連接染料的短-中期體內(nèi)示蹤研究,以及體外細(xì)胞毒性、吞噬、增殖、抗原遞呈,或其它共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。


稀釋液C(Diluent C)是本試劑盒配套提供的一種水溶性溶液,特別設(shè)計(jì)的一種標(biāo)記媒介能維持細(xì)胞活力,同時(shí)zui大化染料溶解性和標(biāo)記過程中的染色效率。Diluent C對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞來說是等滲的,不含去污劑或有機(jī)溶劑,也不含生理鹽和緩沖劑。根據(jù)細(xì)胞類型,染料標(biāo)記后膜的內(nèi)在化程度,標(biāo)記細(xì)胞可能呈現(xiàn)不同的狀態(tài),從明亮,到均勻點(diǎn)狀或斑駁狀。然而,PKH67熒光在生理范圍內(nèi)不依賴于pH,且每個(gè)細(xì)胞的熒光強(qiáng)度通常不受染料位置的影響。


PKH67細(xì)胞連接試劑盒 細(xì)胞染色

圖1. PKH67的激發(fā)和發(fā)射光譜圖


我司(懋康生物)提供三種規(guī)格的PKH67細(xì)胞連接試劑盒(用于常規(guī)細(xì)胞膜標(biāo)記),其中:

Mini Kit(CAT#:MX4023-100UL)建議用于小量或初步研究。當(dāng)使用2ml染色體積(含2μM終濃度的PKH67),本試劑盒含有足量的染料用于檢測(cè)25次細(xì)胞樣本(2×107個(gè)細(xì)胞/次),和足量的Diluent C用于5次細(xì)胞樣本(2×107個(gè)細(xì)胞/次)。用戶需根據(jù)細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)?zāi)康膩韮?yōu)化確定的染料濃度。

Midi Kit(CAT#:MX4023-200UL)適用于中量研究,比如體外細(xì)胞增殖或毒性研究。當(dāng)使用2ml染色體積(含2μM終濃度的PKH67),本試劑盒含有足量的染料用于檢測(cè)50次細(xì)胞樣本(2×107個(gè)細(xì)胞/次),和足量的Diluent C用于30次細(xì)胞樣本(2×107個(gè)細(xì)胞/次)。用戶需根據(jù)細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)?zāi)康膩韮?yōu)化確定的染料濃度。

Maxi Kit(CAT#:MX4021-500UL)適用于大量或體內(nèi)研究。當(dāng)使用2ml染色體積(含2μM終濃度的PKH67),本試劑盒含有足量的染料用于檢測(cè)125次細(xì)胞樣本(2×107個(gè)細(xì)胞/次),和足量的Diluent C用于30次細(xì)胞樣本(2×107個(gè)細(xì)胞/次)。用戶需根據(jù)細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)?zāi)康膩韮?yōu)化確定的染料濃度。


產(chǎn)品包裝

組分

名稱

貨號(hào)(規(guī)格)

MX4023-100UL

MX4023-200UL

MX4023-500UL

MX4023-A

PKH67 Dye (1×10-3M in EtOH)

1×100μl

2×100μl

1×500μl

MX4023-B

Diluent C

1×10ml

2×30ml

2×30ml


保存與運(yùn)輸方法

保存:2-8oC避光保存,1年有效。其中組分A(PKH67 Dye)需嚴(yán)格避光,蓋子保持?jǐn)Q緊。

運(yùn)輸:冰袋運(yùn)輸。


注意事項(xiàng)

  1. PKH67是以溶于乙醇的儲(chǔ)存液形式提供,保存的過程中需避光并擰緊蓋子,以防止溶液揮發(fā)引起的染料濃度提高。使用前需檢查是否有結(jié)晶,若有結(jié)晶,需在37℃水浴溶晶,超聲或渦旋直至完quan溶解。

  2. Diluent C使用前需置于室溫回溫之后再配制標(biāo)記用的細(xì)胞和染料工作液。Diluent C是無菌溶液,不含任何防腐劑或抗生素,使用和保存過程中都注意無菌。

  3. PKH67不能保存在Diluent C內(nèi),保存在Diluent C的染色工作液需在使用前配制,現(xiàn)配現(xiàn)用。

  4. 熒光染料均存在淬滅問題,操作和儲(chǔ)存過程中需注意避光,以減緩熒光淬滅。

  5. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。


操作步驟

1. 自行準(zhǔn)備儀器和試劑(試劑盒不提供,用于常規(guī)細(xì)胞膜標(biāo)記)

﹒良好分散,均勻的單細(xì)胞懸液(懸浮于組織培養(yǎng)基)

﹒含血清的組織培養(yǎng)基(完quan培養(yǎng)基)

﹒不含Ca2+、Mg2+和血清的培養(yǎng)基,或生理鹽溶液(比如,DPBS或HBSS)

﹒血清,白蛋白或其他系統(tǒng)兼容的蛋白

﹒聚丙烯錐底離心管(4-15ml)

﹒能控溫的離心機(jī)(高達(dá)1000×g)

﹒熒光分析用儀器(熒光酶標(biāo)板,熒光或共聚焦顯微鏡,流式細(xì)胞儀)

﹒無菌層流凈化罩

﹒血球計(jì)數(shù)板或自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)裝置

﹒載玻片和蓋玻片


2. 常規(guī)細(xì)胞膜標(biāo)記

【染色流程】:

以下操作流程使用2ml最終染色體積,含2μM PKH67,以及1×107個(gè)細(xì)胞/ml。

以下所有步驟都在室溫下進(jìn)行(20-25℃)。

1. 取一錐底聚丙烯離心管制備2×107個(gè)細(xì)胞的單細(xì)胞懸浮液,用無血清培養(yǎng)基清洗細(xì)胞一次。

2. 400×g離心細(xì)胞5min,得到松散的細(xì)胞沉淀。

3. 細(xì)胞離心后,輕輕吸掉上清。注意不要移動(dòng)任何細(xì)胞并且殘留不超過25μl上清液。

4. 加1ml Diluent C到細(xì)胞沉淀中制備成2×細(xì)胞懸液,用槍輕輕吹勻以確保完quan分散。不可渦旋和不可讓細(xì)胞長期保留在Diluent C中。

5 染色前立即制備2×染色液(4μM in Diluent C):通過將4μl PKH67乙醇儲(chǔ)存液到1ml Diluent C中,充分混勻分散所得。

6. 快速加1ml2×細(xì)胞懸液(Step 1.4)到1ml2×染色液(Step 1.5),用槍立即混勻樣本。混勻后樣本得到的終濃度是1×107個(gè)細(xì)胞/ml和2μM PKH67。

7. Step 1.6中的細(xì)胞/染料懸液孵育1-5min,中間定期混合。染色過程非常快,更長時(shí)間無任何益處。

8. 加入等體積(2ml)血清或其他適當(dāng)?shù)鞍兹芤海ū热?% BSA)終止染色,孵育1min允許結(jié)合多余的探針。

9. 20-25℃,400×g離心細(xì)胞10min,輕輕吸掉上清,確保不會(huì)移動(dòng)細(xì)胞。用10ml完quan培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,轉(zhuǎn)移到一個(gè)干凈無菌的錐底聚丙烯離心管中,20-25℃,400×g離心細(xì)胞5min。然后用10ml完quan培養(yǎng)基清洗細(xì)胞沉淀>2次,以確保完quan去除未結(jié)合染料。

10. 最后一步清洗后,用10ml完quan培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀,用來評(píng)估細(xì)胞回收,細(xì)胞活力和染色強(qiáng)度。離心和重懸沉淀到一理想終濃度的活細(xì)胞懸液。


染色示例(來自文獻(xiàn)資源)

1)文獻(xiàn)來源:Kelly DM, ten Bokum AM, O'Leary SM, O'Sullivan MP, Keane J. Bystander macrophage apoptosis after Mycobacterium tuberculosis H37Ra infection. Infect Immun. 2008;76(1):351-360. doi:10.1128/IAI.00614-07

PKH67染色目的(MKBIO):為了評(píng)估旁觀者凋亡效應(yīng),靶向THP-1單核細(xì)胞用PKH67來標(biāo)記,最終在熒光顯微鏡觀察以確認(rèn)標(biāo)記是否成功。標(biāo)記好的THP-1細(xì)胞(未感染的旁觀者細(xì)胞量:0.5 × 105cells/ml),加入被H37Ra感染的THP-1巨噬細(xì)胞(感染效應(yīng)細(xì)胞量:0.5 × 105cells/ml),接種到2孔的LabTek腔室玻片。效應(yīng)巨噬細(xì)胞經(jīng)H37Ra感染4h,之后劇烈清洗去除胞外細(xì)菌。之后與未感染的PKH67標(biāo)記旁觀者細(xì)胞共培養(yǎng),37℃共培養(yǎng)24或48h。孵育后,上清液去除,細(xì)胞用2% PFA固定,然后用TUNEL TMR監(jiān)測(cè)凋亡,細(xì)胞核用Hochest 33342復(fù)染。用熒光顯微鏡來評(píng)估綠色PKH67標(biāo)記巨噬細(xì)胞的旁觀凋亡效應(yīng)。當(dāng)某一個(gè)單細(xì)胞同時(shí)呈綠色(旁觀者)和紅色(凋亡),表明旁觀者凋亡效應(yīng)的存在。

PKH67細(xì)胞連接試劑盒 細(xì)胞染色

Fig 2. Uninfected bystander apoptosis for macrophages that were in contact with infected macrophages. (A) Macrophages were infected for 4 h with M. tuberculosis strain H37Ra. Uninfected PKH67-labeled green THP-1 cells (0.5 × 105 cells/ml) were added to infected macrophages for 24 and 48 h. Adherent cells were then stained with Hoechst 33342 and with TUNEL TMR (red) to determine apoptosis levels. Superimposition of PKH67-labeled (green) bystander cell fields and TUNEL-positive (red) fields showed bystander apoptotic macrophages (orange). Nuclear staining (blue) (not shown) revealed the total number of cells per field. One representative field at a magnification of ×20 is shown. The arrows indicate apoptotic bystander macrophages. (B) Close-up of apoptotic bystander macrophage (arrow).


2)文獻(xiàn)來源:Hellberg L, Fuchs S, Gericke C, et al. Proinflammatory stimuli enhance phagocytosis of apoptotic cells by neutrophil granulocytes. ScientificWorldJournal. 2011;11:2230-2236. doi:10.1100/2011/413271

PKH67染色目的(MKBIO):50ul肝素化全血用TLR-ligands和細(xì)胞因子刺激30min,之后,將1 × 106PKH67標(biāo)記好的凋亡自體中性粒細(xì)胞加入全血中,置于37℃孵育。60min之后,紅細(xì)胞用裂解液裂解掉,流式細(xì)胞術(shù)觀察中性粒細(xì)胞內(nèi)凋亡細(xì)胞的吞噬水平。

PKH67細(xì)胞連接試劑盒 細(xì)胞染色

Fig 3. Phagocytosis of apoptotic neutrophils by neutrophils in whole blood. 50?μL heparinized whole blood was preincubated with the indicated stimuli for 30?min and, subsequently, 1 × 106 PKH67 stained apoptotic neutrophils were added. Phagocytosis was assessed after 60?min by using flow cytometry. (a) Effect of TLR-ligands on the phagocytosis rate. (b) Effect of various cytokines on the phagocytosis rate. Data show mean + SD from 3 independent experiments, *:P < 0.05. (c)–(f) Representative dot-plots for the quantitative assessment of ingestion of apoptotic cells by neutrophils in whole blood by using flow cytometry. (c) FSC/SSC gating of neutrophils. (d) Negative control: gated neutrophils without apoptotic cells. (e) neutrophil phagocytosis of PKH67-labeled (green) apoptotic neutrophils. (f) Neutrophil phagocytosis of PKH67-labeled (green) apoptotic neutrophils after exposure to Pam3CSK4.


相關(guān)產(chǎn)品

產(chǎn)品編號(hào)

產(chǎn)品名稱

規(guī)格                

MX3010-500T

CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit

500T

MX3009-5MG

CFDA, SE細(xì)胞增殖示蹤熒光探針

5mg

MX3012-500T

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500T

MX3011-50UG

Calcein, AM, Ultra Pure Grade鈣黃綠素(綠色)

50μg

MX4021-100UL

PKH26 Cell Linker Kit for General Cell Membrane Labeling

PKH26細(xì)胞連接試劑盒(用于常規(guī)細(xì)胞膜標(biāo)記)

100μl

MX4022-10ML

Diluent C for General Membrane Labeling稀釋液C

10ml

MX4023-100UL

PKH67 Cell Linker Kit for General Cell Membrane Labeling

PKH67細(xì)胞連接試劑盒(用于常規(guī)細(xì)胞膜標(biāo)記)

100μl

MX4007-50UG

Celltracker CM-DiI活細(xì)胞示蹤劑CM-DiI(紅色)

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MX4001-10MG

DiO (DiOC18(3))細(xì)胞膜綠色熒光探針

10mg

MX4002-10MG

DiI (DiIC18(3))細(xì)胞膜橙紅色熒光探針

10mg








— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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