BODIPY 665/676 脂質(zhì)過(guò)氧化熒光探針

產(chǎn)品關(guān)鍵詞

BODIPY 665/676；C11 BODIPY 581/591；Lipid Peroxidation Sensor；脂質(zhì)過(guò)氧化感受器；鐵死亡（Ferroptosis）；FeRhoNox-1 (Fe2+ indicator) 亞鐵離子熒光探針；

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

BODIPY 665/676是一種親脂性熒光探針，高親和力結(jié)合游離脂肪酸和甘油三酯，具有長(zhǎng)波長(zhǎng)的吸收波長(zhǎng)（λex=665nm）和熒光發(fā)射波長(zhǎng)（Em=676nm）^[1]。與常用的脂質(zhì)過(guò)氧化探針C11 BODIPY 581/591（MX5211-1MG）相似，BODIPY 665/676容易被過(guò)氧化自由基氧化，一旦氧化，發(fā)射波長(zhǎng)遷移到605nm（λex =580 nm）^[2-4]。BODIPY 665/676最重要的優(yōu)勢(shì)在于發(fā)射波長(zhǎng)是676nm，與絕大部分的熒光素之間無(wú)交叉，從而能避免比如自熒光的干擾。BODIPY 665/676具熱穩(wěn)定和高度疏水性特征，從而不會(huì)擴(kuò)散出脂滴。激發(fā)器642nm與吸收波長(zhǎng)665nm接近，由此，在很低的探針濃度下就能得到強(qiáng)熒光信號(hào)^[5]。

產(chǎn)品特征

1） 同義名：(E,E)-3,5-bis-(4-phenyl-1,3-butadienyl)-4,4-difluoro-4-bora-3a,4a-diaza-s-indacene

-3,5-雙-(4-苯基-1,3-丁二烯基)-4,4-二氟-4-硼拉-3a,4a-二氮雜-s-二茚

2） 分子量：448.32

3） 外觀：藍(lán)色固體

4）激發(fā)波長(zhǎng)：665nm

5）發(fā)射波長(zhǎng)：676nm

保存與運(yùn)輸方法

保存：-20oC避光干燥保存，收到貨至少12個(gè)月有效。

運(yùn)輸：冰袋運(yùn)輸。

注意事項(xiàng)

1） 整個(gè)染色過(guò)程中需注意避光。

2） 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用方法（活細(xì)胞成像分析）

1. 染色工作液的準(zhǔn)備

1.1 儲(chǔ)存液的制備：將低溫保存的BODIPY 665/676干粉從冰箱取出后置于室溫至少20min，低速離心后，加入高質(zhì)量DMSO配制成適宜濃度的儲(chǔ)存液，比如：10mM儲(chǔ)存液（即：往5mg BODIPY 665/676加入1.1153ml DMSO，充分溶解后混勻即可），根據(jù)單次用量分裝，≤-20℃保存，盡量避免反復(fù)凍融。

2. 染色步驟

3. 圖像處理和分析

應(yīng)用示例（來(lái)自文獻(xiàn)，僅做參考）

1） 為了測(cè)定脂質(zhì)過(guò)氧化（Lipid Peroxidation），MDA-MB 231細(xì)胞加入BODIPY 665/676（5 μM）孵育30 min。用PBS清洗細(xì)胞兩次以去除多余的染料。用VariosKan酶標(biāo)儀測(cè)定熒光值，結(jié)果以熒光強(qiáng)度（AU）來(lái)展示?！疚墨I(xiàn)來(lái)源】：Consoli V, Sorrenti V, Pittalà V, Greish K, D'Amico AG, Romeo G, Intagliata S, Salerno L, Vanella L. Heme Oxygenase Modulation Drives Ferroptosis in TNBC Cells. Int J Mol Sci. 2022 May 20;23(10):5709. doi: 10.3390/ijms23105709. PMID: 35628518; PMCID: PMC9143660.

Fig 1. (A) Fluorescence images of JC-1 staining after 8 h of treatment. (B,C) Evaluation of treatment effects on mitochondrial membrane potential and lipid ROS accumulation (* p < 0.05, ** p < 0.005, vs. CTRL; ^## p < 0.005, ^### p < 0.0005 vs. erastin). The results are expressed as means ± SEM.

2） 為了評(píng)估中性脂滴含量和脂質(zhì)過(guò)氧化，細(xì)胞用BODIPY 665/676（1μg/ml）于37℃孵育30 min。孵育結(jié)束后，細(xì)胞用FACSCalibur流式細(xì)胞儀分析?！疚墨I(xiàn)來(lái)源：Canonico B, Cesarini E, Salucci S, Luchetti F, Falcieri E, Di Sario G, Palma F, Papa S. Defective Autophagy, Mitochondrial Clearance and Lipophagy in Niemann-Pick Type B Lymphocytes. PLoS One. 2016 Oct 31;11(10):e0165780. doi: 10.1371/journal.pone.0165780. PMID: 27798705; PMCID: PMC5087958.】

圖 2. 圖 6. 通過(guò) BODIPY® 665/676 (BP) 評(píng)估細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)含量和脂肪自噬。(A) 單共焦光學(xué)切片（約 0.8 μm 厚度），顯示來(lái)自對(duì)照、營(yíng)養(yǎng)剝奪和雷帕霉素處理的 tWT 和 tNP 細(xì)胞的 LTG（綠色）和 BP（紅色）的疊加以及與明場(chǎng) (BF) 的相對(duì)合并。插圖顯示脂滴與細(xì)胞外表面結(jié)合，可能是新從細(xì)胞中擠出的，或者就在外細(xì)胞膜下方，最有可能被細(xì)胞胞吐。條形：10μm；插圖為 5 μm。(B) 用于對(duì)照、營(yíng)養(yǎng)剝奪和雷帕霉素施用的對(duì)照和病理細(xì)胞中 LTG 和 BP 的皮爾遜共定位系數(shù) (PCC)。皮爾遜系數(shù)源自三個(gè)wan全獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)，每個(gè)實(shí)驗(yàn)超過(guò) 10 個(gè)字段對(duì)累積結(jié)果有貢獻(xiàn)。各值表示為PCC±SD；**與相應(yīng)對(duì)照相比，P < 0.01。通過(guò)雙向方差分析確定細(xì)胞系之間的差異顯著（***P < 0.001）。

3）為了測(cè)定脂質(zhì)氧化（lipid Peroxides），細(xì)胞用總內(nèi)皮細(xì)胞處理，之后用BODIPY 665/676（2μg/ml）于37℃孵育30 min。之后上流式，用FlowJo 10.0.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。【文獻(xiàn)來(lái)源：Rodrigues, J., Wang, YF., Singh, A. et al. Estrogen enforces the integrity of blood vessels in the bone during pregnancy and menopause. Nat Cardiovasc Res 1, 918–932 (2022). h**ttps*://；doi.org/10.1038/s44161-022-00139-0】

參考文獻(xiàn)

1] Canonico B、Cesarini E、Salucci S、Luchetti F、Falcieri E、Di Sario G 等。(2016) Niemann-Pick B 型淋巴細(xì)胞中的自噬、線粒體清除和脂噬缺陷?！豆部茖W(xué)圖書(shū)館 ONE》11(10)：e0165780。[2] Meyer W、Schmidt J、Busche R、Jacob R、Naim HY。皮膚材料塑料樹(shù)脂嵌入部分中脂質(zhì)的演示。J 顯微鏡。2009年；233：5-9。pmid:19196406 [3] Raudsepp P、Brüggemann DA、Andersen ML。使用親脂性熒光探針 BODIPY(665/676) 和共焦激光掃描顯微鏡檢測(cè)水包油乳液?jiǎn)蔚沃械淖杂苫?。自由基生物醫(yī)學(xué)。2014 年 5 月；70:233-40。doi：10.1016/j.freeradbiomed.2014.02.026。Epub 2014 年 3 月 12 日。PMID：24631488。[4] Raudsepp P、Brüggemann DA、Andersen ML。通過(guò)探針 (E,E)-3,5-雙(4-苯基-1,3-丁二烯基)-4,4-二氟-4-硼酸檢測(cè)到水包油乳液液滴之間自由基轉(zhuǎn)移的證據(jù)-3a,4a-二氮雜-s-indacene，BODIPY(665/676.)。農(nóng)業(yè)食品化學(xué)雜志。2014 年 12 月 24 日；62(51)：12428-35。DOI：10.1021/jf50440

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